长链非编码RNA BANCR在星形细胞瘤中的作用及其机制的研究

摘要：目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA) BANCR在星形细胞瘤中的表达、作用及其机制. 方法 (1)收集南方医科大学珠江医院神经外科自2016年1月到2017年9月手术切除并经病理确诊的脑星形细胞瘤标本24例,另外选取非肿瘤患者经开颅手术切除的正常脑组织6例作为对照,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测星形细胞瘤标本和正常脑组织BA NCR、信号传导及转录激活因子3 (STA T3) mRNA的表达;采用网页软件R2分析胶质瘤数据库GSE4290中星形细胞瘤和非肿瘤组织BANCR mRNA的表达.(2)将体外培养的LN18细胞分为shBANCR组、阴性对照组、BANCR组、空载体组,前2组细胞分别转染携带降低BANCR表达的短发夹RNA和无义对照序列的慢病毒载体,后2组细胞转染能翻译成全长BANCR的慢病毒载体和空白载体,转染48 h后,qRT-PCR检测4组细胞BANCR、STAT3 mRNA的表达;CCK-8检测4组LN18细胞的增殖率;流式细胞仪测量4细胞的凋亡;Transwell实验检测细胞的侵袭和迁移;Western blotting检测4组细胞STAT3、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和丝氨酸苏氨酸蛋白激酶B(AKT)信号通路蛋白的表达.(3)将LN18细胞分为si398组、si1265组、阴性对照组、空白对照组,前3组细胞分别转染靶向STAT3的小干扰RNA si398、si1265和阴性对照无义序列,空白对照组仅转染Lipofectamine 2000,转染48 h后,qRT-PCR检测4组细胞BANCR、STAT3 mRNA的表达;Westem blotting检测4组细胞STAT3蛋白的表达. 结果 (1)星形细胞瘤BANCR mRNA的表达低于正常脑组织,差异有统计学意义(P＜0.05).相关性分析显示星形细胞瘤中BANCR和STAT3 mRNA的表达呈正相关关系(P＜0.05);胶质瘤数据库GSE4290中星形细胞瘤组织BANCR mRNA的表达低于非肿瘤组织,差异有统计学意义(P＜0.05);(2)qRT-PCR检测结果显示与阴性对照组相比,shBANCR组细胞BANCR mRNA的表达降低.与空载体组比较,BANCR组BANCR mRNA的表达显著增高,差异有统计学意义(P＜0.05);4组细胞相对增殖率、凋亡率差异无统计学意义(P＞0.05);细胞迁移和侵袭实验显示,与阴性对照组相比,shBANCR组迁移、侵袭细胞数明显增加.与空载体组比较,BANCR组迁移、侵袭细胞数明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05);Western blotting检测显示与阴性对照组相比,shBANCR组细胞MMP2、MMP9、磷酸化丝裂原活化蛋白(p-MK)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)蛋白的表达增加.与空载体组比较,BANCR组细胞MMP2、MMP9、p-MEK、p-ERK蛋白的表达降低,差异有统计学意义(P＜0.05).(3)与阴性对照组和空白对照组比较,si398组、si1265组细胞STA T3、BANCR mRNA、STAT3蛋白的表达均降低,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 BANCR在星形细胞瘤中呈低表达,STAT3诱导的BANCR通过调控MMP2、MMP9和MAPK信号通路从而抑制星形细胞瘤的侵袭和迁移.