胚胎来源hBM-MSCs对大鼠外周血单个核细胞及脑梗死区TNF-α的免疫抑制作用研究

摘要：目的 观察胚胎来源人骨髓间充质干细胞(hBM-MSCs)能否抑制体外培养的大鼠外周血单个核细胞(PBMCs)增殖和炎症因子表达,探讨哪些人源性促炎因子可以诱导hBM-MSCs发挥免疫抑制作用,并观察hBM-MSCs对脑梗死模型大鼠梗死区肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA和蛋白表达的影响. 方法 将提取的hBM-MSCs和大鼠PBMCs进行共培养,并以在培养基中添加10 μg/mL刀豆蛋白A(ConA)方式激活大鼠PBMCs.(1)实验主要包括hBM-MSCs+PBMCs组、hBM-MSCs+PBMCs+ConA组、PBMCs组、hBM-MSCs组,采用CCK-8法检测各组细胞增殖情况.(2)实验主要包括hBM-MSCs+PBMCs+ConA组、PBMCs+ConA组,采用EUSA法检测培养液中TNF-α、干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-10 (IL-10)的表达水平.(3)实验分为hBM-MSCs+PBMCs(IFN-γ+IL-1 α)组、hBM-MSCs+PBMCs (IFN-γ+IL-1β)组、hBM-MSCs+PBMCs (IFN-γ+TNF-α)组、hBM-MSCs+PBMCs组,采用CCK-8法检测各组细胞增殖情况.(4)SD大鼠30只按随机数字表法分为假手术组、对照组(脑缺血后尾静脉给予生理盐水)和hBM-MSCs组(脑缺血后尾静脉给予hBM-MSCs),每组10只.术后3d取材,采用RT-PCR、Western blotting检测脑梗死区TNF-α mRNA和蛋白表达. 结果 (1)与PBMCs组、hBM-MSCs组相比,hBM-MSCs+PBMCs组吸光度值均显著升高,差异均有统计学意义(p＜0.05).与hBM-MSCs+PBMCs组相比,hBM-MSCs+PBMCs+ ConA组吸光度值明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05).(2)与PBMCs+ConA组TYF-α、IFN-γ[(1030±196) pg/mL、(2880±250) pg/mL]比较,hBM-MSCs+PBMCs+ContA组TNF-α、IFN-γ表达[(160±10)pg/mL、(240±55) pg/mL]明显降低,IL-10表达[(330±45) pg/mL vs.(750±110) pg/mL]明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).(3)hBM-MSCs+PBMCs (IFN-γ+IL-1 α)组、hBM-MSCs+PBMCs(IFN-γ+Ⅱ-1β)组、hBM-MSCs+PBMCs (IFN-γ+TNF-α)组吸光度值与hBM-MSCs+PBMCs组比较均明显下降,差异均有统计学意义(P＜0.05).(4)对照组TNF-α mRNA相对表达量(2.369±0.788)较假手术组(0.490±0.128)显著升高,hBM-MSCs组(1.002±0.408)较对照组显著下降,差异均有统计学意义(P＜0.05).对照组、hBM-MSCs组TNF-α蛋白相对表达量(0.314±0.029、0.240±0.029)较假手术组(0.144±0.028)显著升高,hBM-MSCs组较对照组显著下降,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 hBM-MSCs异种移植可以抑制大鼠体内外炎症反应,但该抑制作用需要炎症因子的刺激;hBM-MSCs静脉植入脑梗死模型大鼠取得的治疗作用与其免疫抑制能力有关.